Guía del usuario para sembrar células en un matraz de cultivo celular de 5 capas
1.Prepare Cell Suspension de la concentración requerida, luego se mueve con medios en un contenedor. Un volumen de 30-50 ml por capa reMediadas.
2.PreawlyDd la solución mixta en el matraz de cultivo celular de 5 capas con una pipeta serológica. Para evitar las orbubbles de espuma, se recomienda colocar la pipeta firmemente contra la pared, permitir que el flujo fluya a lo largo de la pendiente y ahorre un poco de líquido en la pipeta cada vez.
Notas: Whilea 10mlpipette Candispersethe Medium En el fondo, pipeta A25ml solo alcanzará la marca del nido para dispersar el medio.
3. Pososición El matraz múltiple en posición vertical con la marca de nido que lo ataca, lo inclina 45 ° en el sentido de las agujas del reloj y deje que se pare en esta posición durante un tiempo para nivelar el esteíquido en cada capa.
4. Dejó de alinearse en el banco de trabajo con Nest Markfacing hacia arriba.
5. Dirige de manera que Itfromsidettoside distribuya las células de manera uniforme en las superficies de cultivo.
Notas: Tenga cuidado con las burbujas de foamor de toshake y derramando líquido de cada capa.
6.Transferthe Flaskto la incubadora para la incubación
Cultivo medio removal
1. Aspiración
Incline el frasco45 ° en el sentido de las agujas del reloj con la marca del nido frente a usted. Counter-Clock Wise a un ángulo de 45 ° al invertir la múltiples frascas hacia usted. Luego abarque la pipeta serológica en el fondo para la aspiración completamente.
2. Pouring
Incline el frasco45 ° en sentido antihorario con el nido que te mide, vierte los gastos del matraz.
CONSEJOS: Pipetas serológicas de 10 ml de 10 ml sugeridas para aspiración por completo.
Cosecha
1. Entren el suero residual con tampón, agregue la solución de digestión (≥5 ml por capa) y mezcle de manera uniforme. Luego, siga los pasos 3-4 para distribuir a la disociación del reactivo a cada capa.
2.La soporte durante 2 minutos, luego neutralice y mezcle con la solución inactivadora después de los pasos 3-4. Agite suavemente para desalojar las células por completo.
3. Transferir la solución en un tubo de centrífuga u otros recipientes por aspiración o vertido.
4. Engase el matraz con amortiguador durante tres veces, luego transfiera el amortiguador al tubo de centrífuga para el paso y el conteo.
Consejos: Busque video "Nest Multicap Layer Flask" en YouTube (@nestwuxi4075).
